Реакция БТНА с фосфатом

Ответить
GaryNey
Сообщения: 13
Зарегистрирован: 04 ноя 2022, 01:14

Реакция БТНА с фосфатом

Сообщение GaryNey »

На днях я приготовил раствор н-бензоил л-тирозин п-нитроанилида (BTNA) в диметилсульфоксиде с целью проведения анализов активности химотрипсина. Однако, при смешивании этого раствора с фосфатным буффером, смесь обрела жёлтый цвет. Вот что я сделал:

1. Приготовил раствор BTNA в ДМСО. Концентрация BTNA- 1.4mM
2. Приготовил фосфатный буффер с концентрацией 5mM. Сначала я расстворил 0.44г K2HPO4 в 500mL дистиллированной воды, потом добавил соляную кислоту чтобы довести pH до 7.59
3. В кювету я добавил 0.4mL раствора БТНА, потом добавил 0.1mL фосфатного буффера.

Как только были смешаны фосфатный буффер и БТНА, раствор обрёл жёлтый цвет. Это произошло практически мгновенно. В качестве контрольного опыта, я добавил обычную дистиллированную воду в раствор БТНА. Ничего не произошло. Мой вопрос таков: Что за реакция между БТНА и фосфатом?

В другом эксперименте я смешал раствор HEPES той-же концентрации и pH с раствором БТНА. Ничего не произошло.

Структура БТНА:

Изображение
Последний раз редактировалось GaryNey 27 янв 2023, 01:37, всего редактировалось 1 раз.
xiximik
Сообщения: 179
Зарегистрирован: 07 авг 2022, 16:50

Re: Реакция БТНА с фосфатом

Сообщение xiximik »

попробуй к БТНА добавить соды или NaOH если пожелтеет то я знаю ответ ..... (в нитрогруппе по типу ксантопротеиновой реакции)
GaryNey
Сообщения: 13
Зарегистрирован: 04 ноя 2022, 01:14

Re: Реакция БТНА с фосфатом

Сообщение GaryNey »

При добавке концентрированного раствора NaOH смесь желтеет, наблюдается разделение фаз. Появляется белый осадок.
Изображение

При добавке менее концентрированного раствора NaOH смесь желтеет. Наблюдается разделение фаз, но осадок ко дну кюветы не идёт.
Изображение

В обоих случаях, цвет более интенсивный, чем при добавке фосфатного буффера.

При добавке фосфатного буффера осадка не наблюдается.
Изображение
xiximik
Сообщения: 179
Зарегистрирован: 07 авг 2022, 16:50

Re: Реакция БТНА с фосфатом

Сообщение xiximik »

Мое предположение оказалось верным .....дело не в фосфате ...
GaryNey
Сообщения: 13
Зарегистрирован: 04 ноя 2022, 01:14

Re: Реакция БТНА с фосфатом

Сообщение GaryNey »

Тогда, что тут происходит? Просто -OH группа депротонируется и результирующий продукт имеет жёлтый цвет?
xiximik
Сообщения: 179
Зарегистрирован: 07 авг 2022, 16:50

Re: Реакция БТНА с фосфатом

Сообщение xiximik »

Нитрогруппа типа соли образует.
Вложения
ksanto.jpg
ksanto.jpg (107.04 КБ) 1197 просмотров
Ответить