Реакция БТНА с фосфатом

[GaryNey]

На днях я приготовил раствор н-бензоил л-тирозин п-нитроанилида (BTNA) в диметилсульфоксиде с целью проведения анализов активности химотрипсина. Однако, при смешивании этого раствора с фосфатным буффером, смесь обрела жёлтый цвет. Вот что я сделал:

1. Приготовил раствор BTNA в ДМСО. Концентрация BTNA- 1.4mM
2. Приготовил фосфатный буффер с концентрацией 5mM. Сначала я расстворил 0.44г K2HPO4 в 500mL дистиллированной воды, потом добавил соляную кислоту чтобы довести pH до 7.59
3. В кювету я добавил 0.4mL раствора БТНА, потом добавил 0.1mL фосфатного буффера.

Как только были смешаны фосфатный буффер и БТНА, раствор обрёл жёлтый цвет. Это произошло практически мгновенно. В качестве контрольного опыта, я добавил обычную дистиллированную воду в раствор БТНА. Ничего не произошло. Мой вопрос таков: Что за реакция между БТНА и фосфатом?

В другом эксперименте я смешал раствор HEPES той-же концентрации и pH с раствором БТНА. Ничего не произошло.

Структура БТНА:

[xiximik]

попробуй к БТНА добавить соды или NaOH если пожелтеет то я знаю ответ ..... (в нитрогруппе по типу ксантопротеиновой реакции)

[GaryNey]

При добавке концентрированного раствора NaOH смесь желтеет, наблюдается разделение фаз. Появляется белый осадок.


При добавке менее концентрированного раствора NaOH смесь желтеет. Наблюдается разделение фаз, но осадок ко дну кюветы не идёт.


В обоих случаях, цвет более интенсивный, чем при добавке фосфатного буффера.

При добавке фосфатного буффера осадка не наблюдается.

[xiximik]

Мое предположение оказалось верным .....дело не в фосфате ...

[GaryNey]

Тогда, что тут происходит? Просто -OH группа депротонируется и результирующий продукт имеет жёлтый цвет?

[xiximik]

Нитрогруппа типа соли образует.